Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病征进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内自身病原体到消失1同型乳癌诊断症状的困难重重亲率在学童时期就有很好的刻画，多个口内自身病原体无症状的学童中所有70%在血清转换后10年内罹患乳癌，而随访15年的学童这一比重上升到84%。比较之下，占诊断1同型乳癌一半以上的同型1同型乳癌的患病机制还不能得到前提的分析。

日益多的人开始常用分期该系统来假定1同型乳癌的困难重重：幼体在消失多种口内自身病原体时进入第1收尾，消失血糖异常时进入第2收尾，消失症状时进入第3收尾。一些多发口内自身病原体无症状的幼体，在1期和2期，困难重重较很慢，并发展为患病的1同型乳癌。我们在此之前刻画了都由在首次验证到多种口内自身病原体取样后据估计10年无乳癌的变很慢困难重重者，这三组病人人数少，但不同之处非常明确。随后，我们发现口内自身抗原抗体CD8+T细胞会重排在困难重重减很慢的病人中所理论上不存有，但在同类型患病和依然存有的乳癌病人中所很非常容易验证到。这确实表明，与困难重重病人比较，这些病人免疫重排的适度增强。

早期分析表明，尽管适度性T细胞会(Treg)为数正常，但乳癌病人存有一些机制缺失，其中所有数对IL-2的重排能力减小。此外，乳癌病人中所的现像CD4+T细胞会确实对适度不够具抵抗性，体现为现像T细胞会的诱发消退，自然归因于的Treg和游离归因于的游离Treg，以及抗原历程的CD4+T细胞会中所IL-2重排消退。本分析的目的是刻画了CD4+适度性T细胞会(Treg)在一小群极减很慢困难重重者中所的不同之处，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX分析是一项以人群基础上的纵向分析，在21岁一般而言肺炎的病人直系亲属中所检查1同型乳癌的危险因素。我们在此之前刻画了依然减很慢困难重重者的不同之处，他们保持多重口内自身病原体无症状超过10年，但不能消失乳癌的诊断症状，很慢性或非外阴免疫。随后，10名继续保持无乳癌并愿意提供大量体内取样的减很慢困难重重者纳入T和B细胞会机制统计分析。在目前的分析中所，8名很慢困难重重者(SP三组)，中所位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的口内自身病原体无症状。所有的自发性都处于1同型乳癌困难重重的1期，尽管一些人随后失去了口内自身病原体对某些抗原的无症状重排，然而，一名病人仍然处于2期据估计6年，但不能消失诊断症状，一名病人被诊断为乳癌，该受试者72岁，在捕获实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中所对该诱导展开了实质上评估。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，运用于多参数流式细胞会术和T细胞会诱发试制评估诱导中所Treg的增益、体现同型和机制。常用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、也就是说和回归)展开无监理聚类统计分析，评估Treg体现同型。

结果：与身体健康诱导比较，来自很慢困难重重体的遗忘CD4+T细胞会的监理聚类表明，转录的遗忘CD4+ Treg增益上升，与糖皮质激素游离的TNFR具体亚基(GITR)表述上升有关。一名HbA1c升高的病人与困难重重减很慢者和给定的对照三组比较，Treg曲谱有所多种不同。机制统计分析表明，与身体健康诱导比较，来自减很慢困难重重体的Treg内源性的CD4+现像T细胞会诱发明显损毁。体现为对现像CD4+T细胞会CD25和CD134表述的诱发上升。

上图1 深入的体现同型统计分析表明，CD4+Treg亚同型在很慢困难重重路由表中所上升。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示物表述检验出10个元簇:遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)常用9个多种不同Treg标示作用于的10个元簇的MST。每个结点象征性一个炮兵部队(100个炮兵部队)，很大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在结点三组周围上色。每个结点中所的饼上图声称单个标示的表述级别。(b)每个元聚类的热上图，以表明整体标示表述。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)作用于上图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较同位素为每个metacluster箱子新线上图(同位素> 0.05%)相符为HD和SP三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞会(l)。紫色橘色象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 常用CITRUS的预测模同型得出结论，Treg增益的上升是困难重重减很慢的徽章。分级奈斯(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP自发性和给定的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的象征性性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述展开分离，三维FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及诱导SP 606(紫色)中所CD25+ cd127的增益概述上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯长子集的箱子新线上图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述低压着色，左下角突出的簇被辨认为SP和HD路由表错综复杂的多种不同。(j)箱子新线上图表明了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组中所，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比较同位素(比重)。(k)直方上图表明每个簇的体现同型(粉红色)和Treg标示比较表述与背景表述(紫色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中所标示的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

上图3 与身体健康献血者比较，困难重重减很慢者遗忘treg的GITR上升。每个遗忘CD4+T细胞会元簇(遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表述热上图(sp606不有数在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中所所有HD(红色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表述结合，表明直方上图(c)和概述上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有诱导有数，p< 0.05(紫色)诱导SP 606和给定的HD不有数在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表述，从分级奈斯，从所有HD(红色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)结合，表明直方上图(e)和概述上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

上图4 来自减很慢困难重重的CD4+ treg细胞会控制现像CD4+T细胞会的能力减小。SP三组用紫色的新线和橘色声称，HD三组用灰色的新线和橘色声称，紫色的新线/橘色声称诱导sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被标示为CFSE, Treg按辨别的比重起始。用抗CD3 /28微珠裂解细胞会，培养出来3几天后展开流式细胞会术验证。(a-d)与CD4+接收者者比较应的treg培养出来(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养出来。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。常用无症状对照(转录的作出反应细胞会不含treg)计数诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 现像CD4+T细胞会对减很慢困难重重的T细胞会裂解的诱发不够敏感。SP三组用紫色的新线和橘色声称，HD三组用灰色的新线和橘色声称，紫色的新线/橘色声称诱导sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标示，treg按辨别的比重起始。用抗CD3 /28微珠裂解细胞会，培养出来3几天后展开流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因长子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培养出来。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE诱发%-(b)。(c,d) CD25诱发%-(c)和CD134诱发%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在培养出来出来中所的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得出的论点是，来自减很慢困难重重长子的裂解遗忘CD4+Treg在GITR表述中所得到了扩展和丰富，强调了进一步分析Treg在1同型乳癌安全性幼体中所的异质性的必要性。

译文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28